當前位置:股票大全官網 - 財經新聞 - DNA可以用什麽染料染色?

DNA可以用什麽染料染色?

龍膽紫或醋酸品紅

還有堿性染料或改良的苯酚品紅溶液。

DNA染色實驗

1原理與分析

(1)真核細胞的DNA主要分布在細胞核中,而RNA主要分布在細胞質中。

(2)甲基綠和吡咯酮對DNA和RNA的親和力不同。甲基綠對DNA的親和力強,使DNA呈現綠色,而吡咯酮對RNA的親和力強,使RNA呈現紅色。用甲基綠和皮洛英混合染料對細胞進行染色,可以同時顯示細胞中DNA和RNA的分布。(同時,甲基綠與二苯胺或龍膽紫平行。)

③鹽酸的作用

①鹽酸可改變細胞膜的通透性,加速染料的跨膜轉運;

②鹽酸能使染色體中的DNA與蛋白質分離,有利於DNA與染料的結合。

註意事項?

1.材料的選擇

①選擇的實驗材料應易於獲得和觀察;

②常用的觀察材料是人口腔上皮細胞和洋蔥鱗片葉表皮細胞(為避免原始顏色的幹擾,不應使用紫色表皮細胞)。

2.材料要點

①服用口腔上皮細胞前,先漱口,避免藥片中雜質過多;

②取洋蔥表皮細胞時,盡量避免材料上的葉肉組織細胞。

3.沖洗滑梯時,水流速度應盡量緩慢,禁止用水龍頭直接沖洗。?

4.安全要點是什麽?

①用酒精燈烘烤載玻片時,不要只關註材料,而是在火焰上來回移動載玻片,使載玻片均勻受熱,以免破損;

(2)烘烤後的載玻片不要立即放入裝有稀鹽酸的燒杯中,最好先自然冷卻1分鐘。

5.用高倍鏡頭觀察材料時,只能使用細調焦螺釘進行調焦,不得移動粗調焦螺釘。

主要步驟(以觀察口腔上皮細胞為例)

1.繪圖材料?

①滴:在幹凈的載玻片上滴壹滴0.9%的NaCl溶液;?

(2)刮:用無菌牙簽在口腔內側壁輕輕刮幾下;?

(3)塗膜:將牙簽上的碎屑塗在載玻片的生理鹽水中;?

④烘幹:將塗有口腔上皮細胞的載玻片置於酒精燈火焰上烘幹。?

水解

①溶液:將幹燥的載玻片放入裝有30毫升8%鹽酸的小燒杯中,水解物質;

②保證:將小燒杯放入裝有30℃溫水的大燒杯中5分鐘。?

沖洗汙漬

①沖洗:用慢蒸餾水沖洗載玻片10秒;

②抽吸:用吸水紙吸幹載玻片上的水分。

4.染色?

(1)染色:將2滴吡羅紅和甲基綠的混合染料滴在載玻片上,染色5分鐘;

(2)抽吸:抽吸多余染料;

③蓋:蓋上蓋玻片。

5.觀察?

①低:在低倍物鏡下,尋找染色和淺色均勻的區域,移至視野中心,調整物像清晰;

②高倍:轉向高倍物鏡,調整細焦點螺旋,觀察細胞核和細胞質的染色情況。

2%甲基綠水溶液的制備

將甲基綠蒸餾水加入50毫升,用氯仿提取。甲基綠水溶液的提取:甲基綠是壹種綠色粉末,屬於三苯甲烷染料,是氯甲烷作用於結晶紫形成的化合物。由於甲基化作用,甲基綠比甲基綠差,引入的甲基連接不牢固,容易從甲基綠中丟失。另壹方面,在甲基化過程中,壹些結晶紫沒有產生甲基綠,因此有人認為a中往往有少量的甲基紫或結晶紫。然而,有人認為甲基紫是甲基綠的衰變產物,在儲存過程中會不斷產生甲基紫。因此,在制備試劑時,必須首先提取甲基綠中含有的甲基紫或結晶紫,這樣才能將細胞核中的DNA染成綠色。萃取方法是將20毫升2%的甲基綠水溶液倒入幹凈的分液漏鬥中,加入20毫升氯仿充分搖勻,使其中的甲基紫溶解於氯仿中而變成紫色。轉動分液漏鬥下部的沙塞,緩慢反復地替換三氯甲烷,直到三氯甲烷不再呈紫紅色,得到純凈的甲基綠溶液。

英文名:Methyl Green分子式:C27H35Cl4N3Zn分子量:608.78 IUPAC名稱:4-((4-(二甲基氨基)苯基)(4-(二甲基亞胺)環己-2,5-二亞烯基)甲基)-n-乙基-N,N-二甲基苯胺二氯化物鋅(II)Methyl Green為綠色微晶或亮綠色粉末,具有金屬光澤。溶於水,藍綠色。微溶於乙醇,不溶於戊醇。在鹽酸中呈紅黃色,在氫氧化鈉中無色。試劑溶液在可見光區有壹個吸收峰(λmax=633.8nm)。它與ReO4-,HgCl42-,BiI4-,AuCl4-和GaCl4-形成離子締合復合物。用於汞離子、稀土離子等的光度測定。,以及鐵氰化物、酸堿指示劑和細細胞染色的定性檢測。

甲基綠是壹種堿性染料,容易與聚合度高的DNA結合而呈現綠色。又稱雙綠SF雙綠SF。帶金色光澤的綠色晶體,或淺綠色粉末。溶於水,藍綠色。微溶於乙醇,不溶於乙醚。它是由氯甲烷與甲基紫(C.I。堿性紫1)反應制備的。商品通常是鋅復鹽C26H33N3Cl2ZnCl2(稱為C.I。堿性藍20)。用於細菌染色(新鮮標本核染色)的甲基綠-鹽酸混合物用於驗證精子、淋球菌和肥大細胞染色。甲基綠可以用來識別DNA。當DNA遇到甲基綠(常溫)時會被染成藍綠色。甲基綠-派羅寧是壹種堿性染料,能與細胞中的DNA和RNA結合,顯示不同的顏色。當甲基綠和派羅寧用作混合染料時,甲基綠選擇性地與染色質中的DNA結合而顯示綠色或藍色;吡咯寧選擇性地與核仁和細胞質中的RNA結合,並顯示紅色。原因可能是兩種染料的混合染料溶液中存在競爭,兩種核酸分子都是聚合物,但它們的聚合度不同。

甲基綠容易與高聚合度的DNA結合而呈現綠色。然而,焦寧與聚合度較低的RNA結合時呈紅色(但解聚的DNA也可以與焦寧結合顯示紅色)。也就是說,RNA對派若寧有很大的親和力並被染成紅色,而DNA對甲基綠有很大的親和力並被染成綠色。

用法和制備方法關於吡羅紅甲基綠分裝粉(1試劑)0.9%氯化鈉溶液、8%鹽酸、醋酸鈉、醋酸、蒸餾水和吡羅紅甲基綠混合粉的用法和制備方法。如果化學試劑商店沒有吡隆紅和甲基綠的混合粉末,可以分別購買甲基綠和吡隆紅G,然後按照溶液A的第二種方法配制(見下圖)。(2)染料的制備)①染料A溶液的兩種制備方法第壹種方法:取1 g皮洛寧甲基綠粉末,加入100 mL蒸餾水中,然後用濾紙過濾,濾液裝入棕色瓶中備用。第二種方法:將2克甲基綠溶解在98毫升蒸餾水中,將5克吡羅紅溶解在95毫升蒸餾水中。在16 mL蒸餾水中加入6 mL甲基綠溶液和2 mL皮洛英溶液,即為溶液A,置於棕色瓶中備用。(註:皮洛英G用於核酸染色。請不要誤買皮洛英B。(2)染料溶液B的制備方法溶液B是壹種緩沖溶液,由乙酸鈉和乙酸混合而成。首先,取16.4克醋酸鈉溶於蒸餾水中至1 000毫升備用;然後取12毫升醋酸,用蒸餾水稀釋至1 000毫升備用。取30毫升配制好的乙酸鈉溶液和20毫升稀釋的乙酸,加入50毫升蒸餾水,配制pH值為4.8的溶液B(緩沖液)。(3)染料的制備通過混合溶液A和溶液B來制備染料..取20毫升溶液A和80毫升溶液B混合,這就是實驗中使用的pirome紅甲基綠染色劑。應該註意的是,試劑應該現在使用。