（1）合適的介質這裏有兩個公式。
1配方:馬鈴薯250克（取其提取物800毫升）、紅菇腐殖質300克（加水400毫升，煮沸20分鐘，冷卻後取200毫升清液）、糖25克、B、維生素B 100毫克和瓊脂23克。按常規調料熬制，裝管，滅菌制成斜面。
配方2:新鮮松針100克（煮沸並過濾），麥芽汁（即84毫升水116克糖）100毫升，磷酸二氫鉀0.2%，硫酸鎂0.15%，葡萄糖2%，維生素B 10毫克。
（2）紅菇菌肉的生殖菌絲由球形細胞（囊狀菌絲）組成，埋藏在管狀通訊菌絲的基質中，因此再生能力較低。例如，使用帶有蘑菇帽的蘑菇肉作為分離材料的成功率較低。因此，分離紅菇應選擇柄部中間的組織塊。
組織分離法屬於無性繁殖法。在適宜的培養基和生長條件下，利用紅菇菌柄組織塊分離培養純菌絲是壹種簡便易行的方法。它具有很強的再生能力和維持親本物種的能力。這種分離方法操作簡單，不易變異。但如果菇體感染，用這種方法得到的菌絲體容易退化；如果蘑菇太大太老，用這種方法獲得的菌絲體存活率也很低。
（3）分離操作技術規範
（1）殺菌消毒以去除蘑菇底部的雜質，將其浸泡在0.1%氯化汞溶液中1-2分鐘，取出並用無菌水沖洗2-3次，然後用無菌紗布擦幹。
（2）切好種塊，將處理好的種菇和用於分離的器具同時放入接種盒中，取壹個玻璃器皿，放入3-5克高錳酸鉀，倒入8-10毫升甲醛，熏蒸30分鐘後即可操作。或用氣溶膠消毒劑消毒。然後用手術刀將蘑菇切成兩半，用刀在菌柄中間切成3毫米見方的組織塊，用接種針挑起來，迅速放入試管中，並立即用棉塞塞住。
（3）接種培養:接種人體組織塊的試管在24℃恒溫培養3天，菌絲開始萌發。經過反復提純，得到了紅菇母種。紅菇菌絲生長速度緩慢，接種10天後平均日生長速度為0.67 cm。在PDA培養基上，菌絲體呈白色至黃色，氣生菌絲體很少，並出現黃褐色色素。10天後，選擇菌絲發育快的試管繼續培養，剔除汙染菌和生長弱的菌。培養20-25天後，菌絲布滿試管。