華佗夾脊穴有34個穴位：〔定位〕第壹胸椎至第五腰椎，各椎棘突下旁開0.5寸。〔解剖〕橫突間韌帶和肌肉中，壹般位置不同，涉及的肌肉也不同．大致分三層：淺層斜方肌，背闊肌，菱形肌；中層有上下鋸肌；深層有骶棘肌和橫突棘突間的短肌．每穴都有相應椎骨下方發出的脊神經後支及其伴行的動，靜脈叢分布．〔主治〕第壹胸椎至第三胸椎主治上肢疾患；第壹胸椎至第八胸椎主治胸部疾患，第六胸椎至第五腰椎主治腹部疾患，第壹腰椎至第五腰椎主治下肢疾患．〔操作〕斜刺0.5～1寸．
但是在臨床運用中，夾脊穴被不時擴大,如頸段和骶段夾脊處已被不少醫家列入夾脊穴範圍。據夾脊穴的地位特點及古代解剖知識，夾脊穴當包括C1至S4脊旁0.3～1寸範圍內的壹切穴位。