合生素基因構建的mirna海綿抑制載體經過特殊優化設計，增強吸附能力的同時增加更多的結合位點，從而提高成熟miRNA或siRNA的抑制能力，減弱細胞內miRNA或siRNA引起的基因沈默效應，以研究miRNA或siRNA的功能缺失。
最近設計了壹個項目，驗證microRNA是否與預測的目標基因結合。同時，目的基因3’-UTR區域的SNP是否影響它們的關系。這個SNP位點位於種子區，推測它也有壹定的功能。第壹步是將microRNA克隆到表達載體中，並克隆PGL-3對照熒光素酶基因下遊的3’-UTR區(包括野生型和突變體)。雙轉化後，用熒光素酶報告系統檢測兩個基因是否結合，snp位點是否影響結合。
請告訴我具體的實驗設計:
1.選擇哪個細胞系做實驗，哪個是目的基因和miRNA內源表達高或低。細胞系的基因型影響實驗結果嗎？
2.我選擇的向量合適嗎？如果慢病毒的表達載體(商品)可用於miRNA，可以直接使用還是需要重做？PGL 3號控制室還好嗎？是否有適合克隆的位點，只找到XbaI。PGL-TK作為內控，因為我對這套向量不熟悉，不知道選擇它是否合適。
3.如果驗證成功，需要哪些實驗證據，後續的功能研究如何開展？還需要用RNAi抑制目的基因的表達，然後轉入野生型和突變型基因才能看到效果嗎？