最近自噬研究很熱，抗藥的抗藥的，雕亡的不雕亡的都開始拉起來。
這篇文章的題目是《烏司他丁通過抑制自噬降低肝癌細胞對表柔比星的耐藥性》，基本可以作為入門級自噬研究的參考模板。
本文的思路是:首先證明EPI可以誘導肝癌細胞自噬，而UTI可以抑制這種自噬；那麽UTI可以促進EPI誘導的細胞雕亡；證明UTI抑制自噬，促進EPI誘導的細胞雕亡。進而證明UTI是通過NF-kB信號通路發揮作用的。最後，進行了成瘤實驗。
我們看第壹個Fig，基本就能明白自噬做了什麽。
自噬的研究基本上可以分為以下幾個層次:
1.證明自噬參與了妳的研究表型:****western檢測LC3，p62；LC3雙熒光檢測細胞自噬流量。電鏡觀察自噬現象；
自噬過程中，細胞質LC3(即LC3-I)會水解壹小段多肽，該多肽會轉化為自噬膜型(即LC3-II)。LC3-II/I的比值可以估計自噬的水平。
但LC3的抗體對LC3-II的親和力較高，因此常造成假陽性。因此，LC3的亞細胞結構定位通常用於輔助實驗。例如，本文使用漢比奧公司的****mRFP-GFP-LC3腺病毒進行分析。
2.證明自噬對妳的表型起關鍵作用:* *加入自噬抑制劑3-MA和激動劑雷帕黴素，然後測試表型(功能)；
這裏使用了兩種自噬抑制劑:3-MA和CQ(氯喹)。
3.找到將表型與自噬聯系起來的分子:* *檢測pI3K途徑、Beclin-1、ATG家族成員等自噬途徑，看哪壹個與表型正相關；
4.基因操作中的分子3、檢測自噬與表型* * * *:解釋分子鏈接自噬與表型的機制；
這壹點需要應用到科霍定律和回收實驗中。
...壹條華麗的分界線...
李莫愁博士:* * * *而普通的自噬研究就是這樣壹個模型:(感謝漢恒生物的蔡博士為我們整理)
在自噬表型的研究中，常用含mRFP-GFP-LC3融合蛋白的韓衡氏腺病毒感染細胞。用MRFP標記和追蹤LC3，GFP的減弱可以指示溶酶體和自噬體融合形成自噬體，即由於GFP熒光蛋白對酸敏感，當自噬和溶酶體融合時，GFP熒光被淬滅，此時只能檢測到紅色熒光。
像這樣:
(2014，腎臟國際，IF=7.916)
(本實驗使用的自噬工具為漢恒生物Ad-mRFP-GFP-LC3雙標記腺病毒)