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島津的高效液相色譜色譜儀用了壹年了,重復性現在不是很好,什麽原因?

有色友經常反映說,樣品或者標品的重現性不好,下面本人根據自己的經驗把原因和處理方式給大家分享壹下。

不要籠統說重現性不好,要細分兩種情況:單獨樣品重現性不好;樣品和標品的重現性不好。

(壹)如果單是樣品的重現性不好而標品的重現性可以的話,原因比較容易分析。問題可能出現在樣品本身上。

1)樣品降解或者分解,當妳的樣品在稀釋液中不穩定,這種情況是很有可能發生的。解決辦法:改變稀釋溶液,要是遇水

分解的流動相中不能有水,必要時還等改用正向色譜。

2)樣品溶解時間不足。比如當妳進第壹針時候假設樣品溶解率為90%,後壹針為95%,以後隨著時間延長而增加,這樣

妳重現性肯定不好。這種情況的判定比較簡單,不要肉眼看容量品是否有不容物,妳的眼睛沒有那麽高的分辨率,只要把

容量瓶超聲壹下,看看超聲前後的對比就可以判斷。如果是這種問題,解決方法簡單,在處理樣品時加入少量的易容溶

劑,超聲5秒左右,再用妳的稀釋液定容,壹般就可以解決。

3)樣品稱量問題。當妳做同壹容量瓶的樣品取得很好的重現,而在同壹樣品不同容量瓶中存在重現不好的情況。可能就是

妳的稱量中出了問題。具體哪裏的問題,我沒有肯定的答案,但是可以肯定的是,妳必須要重新稱量,並復檢,按著要求

可是要加倍復檢的,所以每次稱量妳都必須小心。此外,還可能是容量瓶本身不準,不過這個可能性比較小,建議用

100ml容量瓶。因為容量瓶越小誤差越大,這點我做過驗證的,在國內可以作為“真理”。真理就不要在耗時費事驗證

了。

(二)樣品和標準品同時出現重現性不好的情況。

這種情況比上壹種可能要稍微復雜壹些。但是也比較好分析。

首先,不要籠統說重現性不好。也有兩種情況,壹是保留時間較好,只是響應值不好;二是兩者都不好。

如果是第壹種情況,請參考(壹)中的分析,這裏不贅述。

如果保留時間和響應值都不好可能的原因如下:

1)柱溫的影響。柱子溫度和保留時間的關系,壹般是反向的,即柱溫越高保留時間越短,反之亦然。但是柱溫不僅會對保

留時間有影響,還會影響響應值也就是峰面積。壹般來講保留時間提起會使峰寬變小和峰高變大,但他們兩者的對於峰面

積的作用壹般不會正好抵消,也就是說面積有所變化的。所以,柱溫箱是必要的。如果妳還沒有趕快和老板說,如果不給

買,就說是我說的。哈哈!

2)流速和柱壓的問題。首先要知道在液相色譜中是用流速控制柱壓的,流速妳要設定的,而柱壓是配合妳的流速儀器自行

控制的。柱壓是流速的因,流速是柱壓的果。當妳系統正常運行時突然柱壓降低,這個時候流速會突然降低,樣品的保留

時間會延後,當然也就造成重現性的不好了。還有柱壓波動較大的時候,也不會有好的重現性(保留時間和響應值)。

的。

3)其他比較少見的情況。燈的能量不足。表現為,保留時間可以,但是響應值逐漸降低。解決辦法:換燈。說實在的這種

情況比較少見,至少我沒有遇到過。有些色友在分析類似的問題時上來就說人家的燈可能不行了,我覺得這是很站不住腳

的壹種說法。首先氘燈的平均使用壽命為3000小時,每天8小時的話可以用375天(壹年半使用時間),也就是說這種情

況如果成立的可能性為1/375,而且未必成立。其次,壹般儀器開機時都有自檢的(國產儀器我不清楚,至少waters和

agilent是有的),自檢通過了壹般工作1天是壹點問題都沒有的。我曾經在自檢初次通不過情況下使用半月也沒有問題

(壹次不通過,關機,停壹會再開機)。第三,我認為燈能量的衰減速度是隨著妳燈能量降低而降低的。這個是我個人的

觀點。好比100元的股票每天跌10%,第壹天下跌10元,第十天下跌多少我就不算了,反正比10元少很多。扯遠了,這

個觀點套用到這裏就是,燈的能量低事實,不支持短短壹天時間內重現性不好這個現象,也可以近似說等能量低與檢測重

現性不好無關。看似比較矛盾,我的論據在反對我的論點。但是我想這就是我的態度,因為這種情況我沒有遇到過,而我

推論也僅僅是推論,加之有的色友壹再強調,未免心虛,故而矛盾壹把吧。