這幅畫可以說是世界上最著名的油畫作品，很少有其他作品能像它壹樣，被人審查、研究、演繹或是惡搞。它的擁有者法國政府把它保存在巴黎的盧浮宮供公眾欣賞。它是直接畫在白楊木上的，此畫面積不大，長77厘米，寬53厘米。這幅半身肖像油畫描繪的是壹位表情內斂的、微帶笑容的女士，她的笑容有時被描寫為“神秘的笑容”。它也是達芬奇的代表作。
達芬奇在1502年（意大利文藝復興時期）開始創作《蒙娜麗莎》，並根據瓦薩裏（Vasari）的記載，這幅畫耗時4年完成。
在1516年，法國國王弗朗索瓦壹世邀請達芬奇去國王城堡昂布瓦斯城堡附近，壹個叫Clos Lucé的地方工作。這幅畫從意大利被帶到了法國，國王花了4000埃居買下了它，並把它保存在楓丹白露宮，直至路易十四時期。
在很長的壹段時間裏，人們認為這幅畫在達芬奇死後曾被人剪裁過，畫的兩邊被切割掉壹部分。在《蒙娜麗莎》的早期版本中，畫的兩側有兩個的柱子，而這只在原稿中出現過。
但法籍科學工程人員 Pascal Cotte 使用世上第壹部多光譜相機，獲得盧浮宮罕見地允許他拍攝《蒙娜麗莎》。他運用紫外線及紅外線拍攝取得的高畫質影像，證明《蒙娜麗莎》早年是畫在白楊木畫板上，且經過畫作分層範圍及前置作業（石膏底）顯示這幅畫並未被切割過。
蒙娜麗莎的畫中人是誰今天無法確切考證，藝術史學家曾討論過多種可能性。許多人相信畫中的女士是壹位佛羅倫薩富有的絲綢商和政府要員的妻子。這個理論來自於達芬奇晚年的壹句話，他提到過壹幅“巨人朱利亞諾·梅迪契委任的壹位佛羅倫薩貴婦”的肖像。
達芬奇的第壹位傳記作者說，蒙娜麗莎確有其人，她是壹位弗朗西斯科·戴爾·吉奧亢多（Francesco del Giocondo）的夫人。吉奧亢多的確存在過，他是佛羅倫薩的壹位富商，在當地的政治界也是有權有勢的。關於他的夫人麗莎·喬宮多我們今天幾乎壹無所知。事實上沒有任何歷史記錄說明她是梅迪契的情人或達芬奇的確是指她。
達芬奇後來還有壹句話產生過壹些混亂。在這句話中他提到蒙娜麗莎和壹幅弗朗西斯科·戴爾·吉奧亢多的肖像。因此有人提出了壹個有爭議的理論說蒙娜麗莎是壹個男人。
這幅畫的意大利語標題La Gioconda來自達芬奇1625年的壹封信。在這封信中他說這幅作品展示了壹位Gioconda的半身像。但在這裏必須註明的是，在意大利語中Gioconda也是“壹位寬心的婦人”的意思，並不壹定是壹個名字。
有人提出了壹個建議說蒙娜麗莎其實是壹幅自畫像。假如在電腦上把蒙娜麗莎的像與達芬奇的壹幅自畫像重疊到壹起的話，兩幅像的面部壹模壹樣。但批評者認為這個結果只不過是因為兩幅像是同壹個畫家用同壹種畫風畫而造成的。
還有人提出壹個建議說蒙娜麗莎實際上是壹位米蘭的大公夫人。達芬奇為這位夫人做了11年的宮廷畫家。畫中人的深綠色衣服說明她是這個大公家庭裏的壹為貴婦人。而蒙娜麗莎與這位大公夫人的其他肖像的相似性是顯而易見的。
有加拿大科學家利用紅外線成像，發現這幅偏暗的畫像曾經經過修改，原本的畫像中蒙娜麗莎是盤發而非散發，並且披著孕婦穿的薄紗，可以肯定這幅畫是為了慶祝第二胎的出生。
德國海德堡大學專家證實，達芬奇（Leonardo da Vinci）畫作《蒙娜麗莎》那位微笑女子，的確是佛羅倫薩富商喬宮多的妻子麗莎·喬宮多（Lisa Gherardini）。他們發現達芬奇朋友亞美利哥（Agostino Vespucci）1503年10月於壹本書的書邊上寫明，達芬奇當時在畫3幅畫，其壹是蓋拉爾迪尼畫的肖像。
蒙娜麗莎是意大利最早的壹幅半身畫像，畫中人物坐著並把交疊的雙手擱在座椅的扶手上，從頭部至腰部完整的呈現出半身形體，壹改早期畫像只畫頭部及上半身、在胸部截斷的構圖，為日後的畫家及攝影師樹立新的肖像圖基本架構。
達·芬奇使用金字塔結構來將畫中的女士簡單而充滿地放置在畫中。她的疊在壹起的手構成金字塔前方的角。她的胸部、頸部和面部煥發出與她的手同樣的柔軟的光芒。這些有機部分的光芒的變化顯示出肉體的豐滿和柔潤，包括上述的笑容。西格蒙德·弗洛伊德將這個笑容理解為畫家對他母親的感性的懷念。其他人將它描寫為天真的、誘媚的或甚至於出神的或悲傷的。應該指出的是達·芬奇當時的肖像畫多半帶有這樣的微笑。
神秘的蒙娜麗莎除了以其微笑著稱，畫中人物的眼神也相當獨特。無論妳從正面哪個角度賞畫，都會發現蒙娜麗莎的眼睛直視著妳，這使人感到蒙娜麗莎的眼睛仿佛是活的，會隨著觀眾的視角遊走，並對所有觀眾抱以永恒的微笑。
壹些學者試著討論為什麽不同的人對這個微笑的感覺不同。這些理論有科學性的，也有的從蒙娜麗莎的實際人物和感覺出發。有人說，蒙娜麗莎的微笑只有在斜眼看的時候才看得出來。還有人認為這個微笑如此捉摸不定因為它利用了人的視覺中的幹擾。提出蒙娜麗莎是米蘭公爵夫人的理論的人說，蒙娜麗莎的微笑是如此悲傷因為這位公爵夫人本人的生活很悲傷，因為她的丈夫如此有權勢、是個酒鬼和經常打她。這為公爵夫人自己曾說她是世界上“最不幸的妻子”。
雖然這幅肖像的手法簡單，但人與背景之間的和諧使這幅畫成為歷史上最著名的、分析得最細致的壹幅畫。畫中婦人的頭發與衣服的曲線與背景中山谷和河流的彎曲相稱。整個畫的和諧性體現了達·芬奇對人與自然界的聯系的觀念，使這幅畫成為達·芬奇的世界觀和他的天才的永久的記錄。
在人的背後，壹個遙遠的背景壹直延伸在遠處的冰山。只有彎曲的道路和遠處的橋梁顯示著人的存在。模糊的分界線、瀟灑的人物、光亮與黑暗的明顯的對比和壹個總體的冷靜的感覺都是達·芬奇的風格。
蒙娜麗莎是第壹幅將人畫在壹個想象的背景前的肖像畫。有意思的是後面的風景並不對稱。人左面的風景比右面的明顯低。有的評論家認為這說明左面的部分是後加上去的。
蒙娜麗莎被多次修復。X光探測證明在現存的蒙娜麗莎後面還有三個過去的版本。畫的薄的白楊底板的變形比原來想像的要大，因此博物館的修理員正在考慮怎樣來保持這幅畫的原狀。