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基因組高通量測序的原理

測序方案基於雙脫氧測序法(Sanger等,1977)。為了對來自每個克隆的插入片段進行成對測序,每個質粒模板DNA板應該配備兩個384孔環形測序反應板。

測序反應采用Big Dye Terminator Chemistry 3.1版(Applied Biosystems)和標準M13或常用的正向引物和反向引物。通過biomefx(Beckman)移液工作站建立測序反應。

操縱器負責等分模板樣品並將其與反應溶液混合,反應溶液包含雙脫氧核苷酸、熒光標記的核苷酸、TaqDNA聚合酶、測序引物和緩沖液。

模板和反應板都有條形碼,BiomekFX移液操作工作站上的條形碼閱讀器會進行跟蹤,以確保模板和反應液的轉移沒有錯誤。30 ~ 40個線性擴增步驟在MJResearchTetrads或9700熱循環儀(applied Biosystems)中連續循環。

擴展數據:

技術開發:

高通量測序平臺(high-throughput _ genome _ sequence _ database)從2005年開始,454生命科學公司(2007年正式被羅氏收購)推出了454 FLX焦磷酸測序平臺。

曾經推出3730xlDNA分析儀的應用生物系統(ABI)開始動搖其壹直占據測序市場最大份額的領先地位。

因為他們的拳頭產品,系列毛細管陣列電泳測序儀,遇到了兩個強大的競爭對手,壹個是羅氏的454測序儀。

另壹個是2006年美國Illumina公司推出的Solexa基因組分析儀平臺。為此,ABI公司在2007年推出了自己的固體測序儀。這三個測序平臺是目前高通量測序平臺的代表。

百度百科-基因組高通量測序