溴化乙錠
溴化乙錠(EB)是壹種高度敏感的熒光染料,用於觀察瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中的DNA。溴化乙錠被標準的302 nm紫外透射儀激發,發出橙紅色信號。溴化乙錠含有壹個三環平面基團,可以嵌入DNA堆積堿基之間。它與DNA的結合幾乎沒有堿基序列特異性。在高離子強度的飽和溶液中,大約每2.5個堿基插入壹個溴化乙錠分子。當染料分子插入時,其平面群垂直於螺旋軸,通過範德華力與上下堿基相互作用。該基團的固定位置及其與堿基的緊密接近導致了與DNA結合的染料的熒光。溴化乙錠有壹定毒性,皮膚吸收會造成傷害。對眼睛、皮膚、粘膜和上呼吸道有刺激性。它可以誘發突變,並可能導致癌癥。戴手套和護目鏡,穿防護服,在通風櫃中小心操作。
二甲基亞碸
二甲基亞碸是壹種滲透保護劑,應用廣泛。可以降低細胞的冰點,減少冰晶的形成,減少自由基對細胞的傷害,改變生物膜對電解質、藥物、毒物和代謝產物的通透性。研究表明,DMSO具有嚴重的毒性作用,它與蛋白質中的疏水基團相互作用,導致蛋白質變性,具有血管毒性和肝腎毒性。
(1)吸入:高揮發性濃度可能引起頭痛、頭暈和鎮靜。
(2)皮膚:可灼傷皮膚,使其刺痛,就像皮疹和水泡壹樣。二甲基亞碸如果接觸到含水的皮膚,會產生熱反應。
(3)吸收:吸收風險很低。
使用時避免揮發,準備1%-5%氨水備用,用大量水和稀氨水沖洗皮膚。
丙烯酰胺
聚丙烯酰胺是SDS-PAGE凝膠中的主要成分。未聚合的丙烯酰胺是壹種潛在的神經毒素,可以通過皮膚吸收。丙烯酰胺的危害主要引起神經毒性,以及生殖和發育毒性。神經毒性效應表現為周圍神經和參與學習、記憶和其他認知功能的大腦部分的退化。實驗還表明,丙烯酰胺是壹種可能的致癌物。對職業暴露人群的流行病學觀察表明,長期低劑量接觸丙烯酰胺會引起嗜睡、情緒和記憶改變、幻覺和震顫等癥狀,並伴有手套樣感覺、出汗、肌無力等周圍神經病變。具有累積毒性,不易解毒。因此,在稱量丙烯酰胺和亞甲基雙酰胺粉末時,請戴上手套和口罩,並在化學通風櫃中操作。聚合丙烯酰胺無毒,但使用時要小心,因為其中可能有少量未聚合的丙烯酰胺。
二硫蘇糖醇
二硫蘇糖醇(DTT)與巰基乙醇壹樣,是壹種強還原劑,會發出難聞的氣味。可用作蛋白質的保護劑,防止蛋白質中的半胱氨酸被氧化。也可以在SDS-PAGE電泳中作為樣品的添加劑,使蛋白質中的二硫鍵完全斷裂。吸入、吞咽或皮膚吸收可能對健康有害。當使用固體或高濃度儲存液體時,戴上手套和護目鏡,並在通風櫃中操作。
芐基磺酰氟(PMSF)
苯磺酰氟(PMSF),常用於蛋白質的提取,是胰蛋白酶和糜蛋白酶的抑制劑,能抑制胰蛋白酶和糜蛋白酶等絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶和乙酰膽堿酯酶,是壹種高毒性的膽堿酯酶抑制劑。對呼吸道黏膜、眼睛、皮膚的破壞性很大。吸入、吞咽或皮膚吸收可能致命。佩戴合適的手套和安全眼鏡,並始終在化學通風櫥中使用。如果接觸,立即用大量水沖洗眼睛或皮膚,並丟棄被汙染的工作服。
焦碳酸二乙酯DEPC
DEPC(碳酸二乙酯)能使多種蛋白質失活,是壹種強RNA酶抑制劑。DEPC是壹種潛在的致癌物,因此操作應盡可能在通風條件下進行,並避免與皮膚接觸。DEPC毒性不大,但吸入毒性最大。使用時戴口罩。如果不小心弄到手上,要馬上清洗。RNaseAwayTM試劑可以替代DEPC,操作簡單,價格低廉,無毒。只需將RNase倒在玻璃器皿和塑料器皿表面,浸泡後用清水沖洗去除RNase,即可快速去除玻璃器皿表面的RNaseAwayTM,不會殘留和幹擾後續實驗。
紫外線
紫外光是實驗室中常見的光源。可用於無菌室滅菌,也可用於觀察凝膠中的DNA。紫外線會損害眼睛的視網膜。在沒有防護裝置的情況下,切勿使用肉眼和紫外線光源。實驗室常用的紫外光源有便攜式紫外燈和紫外透射儀。它只能通過吸收有害波長的濾光器或安全玻璃片來觀察。紫外線也是誘變劑和致癌物。為了盡量減少暴露,確保紫外線光源采用適當的保護裝置。在紫外線下操作時,戴上適當的防護手套。
甲醇
甲醇常用於分析試劑或去除脫脂劑,毒性大,易揮發。甲醇的毒性對人體的神經系統和血液系統影響最大。通過消化道、呼吸道或皮膚攝入會產生毒性反應,甲醇蒸氣可損傷人體呼吸道黏膜和視力。急性中毒的癥狀包括:頭痛、惡心、胃痛、乏力、視力模糊甚至失明,然後呼吸困難,最終導致呼吸中樞麻痹而死亡。慢性毒性反應是頭暈、嗜睡、頭痛、耳鳴、視力下降和消化系統紊亂。使用時避免吸入其揮發性蒸汽霧。戴上合適的手套和安全眼鏡。