由於其相對小的分子量、低免疫原性、親水性和在洗滌劑和其他添加劑存在下的可變性，多組氨酸標簽被認為是在天然和變性條件下用於壹系列蛋白質純化目的的最廣泛使用的親和標簽。
重組蛋白可以在不使用蛋白特異性抗體或探針的情況下被檢測和純化。同時，His標簽蛋白檢測中抗His標簽抗體的存在，使得6xHis標簽更受歡迎和青睞。
6xHis標簽通常用於重組蛋白的純化，因為組氨酸殘基的序列在特定的緩沖條件下可以與幾種類型的固定離子(如鎳、鈷、銅)結合，從而達到易於檢測和純化His標簽蛋白的目的。如大腸桿菌等原核系統表達的多組氨酸標簽重組蛋白，通常采用固定金屬離子親和層析或IMAC進行純化，IMAC的全稱是固定化金屬-親和層析。
IAMC是壹種非常有效的分離技術，它利用組氨酸能與金屬離子有親和力的原理來分離蛋白質。比如伯樂的Profinity IMAC media用的是UNOsphere？作為基質，它含有亞氨基二乙酸(IDA)作為二價和三價金屬離子的螯合配體。當金屬離子如Zn2+、Ni2+或Cu2+與配體結合時，含組氨酸的蛋白質將與該色譜介質結合。
在親和層析過程中，載體(通常是珠狀瓊脂糖凝膠或磁珠顆粒)用合適的偶聯劑衍生，例如次氮基三乙酸(NTA)或亞氨基二乙酸(IDA)。這些螯合基團會固定所需的二價金屬離子(如鎳、銅、鈷、鋅)，使這些金屬離子最終負責結合和分離混合蛋白中的靶分子。在選擇使用哪種配體時，妳需要考慮IMAC樹脂的結合能力主要取決於純化蛋白的性質和純化過程中使用的金屬離子。
鎳、鈷和銅是第壹個廣泛用於純化His標簽蛋白的離子，因為它們在水溶液中對組氨酸和半胱氨酸具有良好的親和力。在這三種離子中，鎳是應用最廣泛的金屬離子，它對His標簽蛋白表現出最高的親和力和選擇性。然而，它也會與含有組氨酸基團的非特異性內源性蛋白質結合。鈷提供了最特異的結合和組氨酸標簽，因此當純度是第壹選擇時，鈷是二價陽離子的第壹選擇。與鎳鈷離子相比，銅離子與His標簽蛋白的結合非常強，但其特異性是三種離子中最弱的。因此，當純度不是主要目的時，使用銅離子IMAC。
在制備樣品時，通過酶或機械條件捕獲並裂解細胞。因為聚組氨酸標簽在生理PH和離子強度下與IMAC樹脂結合良好。結合是在幾乎中性的緩沖液中完成的。大多數研究人員使用含有10-25mM咪唑的TBS溶液作為結合/沖洗緩沖液，以防止內源蛋白與組氨酸殘基的非特異性結合。捕獲的組氨酸標簽蛋白的洗脫和回收通常通過增加咪唑濃度(至少200mM)、低PH值或過量的強螯合劑如EDTA來實現。
ELISA或western blot檢測:鎳螯合的辣根過氧化物酶可用於檢測基於HRP的組氨酸標簽蛋白，無需抗體。同時，抗6xHis抗體對那些含有組氨酸標簽的蛋白質具有高度的敏感性和特異性。
凝膠染色:幾種免疫分析方法使用多聚組氨酸標簽，通過抗多聚組氨酸標簽抗體或SDS-PAGE檢測目標蛋白。
蛋白質相互作用下拉:鎳瓊脂糖樹脂可用於純化、鑒定和檢測組氨酸標簽蛋白質的相互作用。
上圖來自對破壞性細胞中rab gt pase相互作用的分析揭示了b中rab 32復合物的抗微生物功能發表在2016期刊《Immunity》上。Act菌遏制，在文獻中，6xHis標簽用於純化Rab蛋白，但在文獻中，為了提高蛋白相互作用的可靠性，提高蛋白的純化效果，使用兩種標簽純化Rab蛋白。
從圖(a)中可以看到FUYW-eXact-6His-Rab的字樣，意思是在Rab分子的N端加了壹個6xHis標簽和壹個eXact標簽，eXact標簽是枯草芽孢桿菌的壹種結構蛋白，可以自我切割。在圖(b)中，我們可以繼續看到在6xHis和Rab分子之間增加了壹個EYFP標簽，這主要是為了在構建慢病毒穩定轉化細胞時方便篩選，所以文獻中也提到了使用空的EYFP質粒作為陰性對照。
文獻中蛋白質相互作用的壹般過程如下(其實圖(b)就是蛋白質純化的過程):