1.該技術依賴於在模板DNA、引物和四種脫氧核苷酸存在下的DNA聚合酶的酶促合成。DNA聚合酶以單鏈DNA為模板,借助壹小段雙鏈DNA開始其合成。壹個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈DNA模板中的互補序列結合形成部分雙鏈。
2.在合適的溫度和環境下,DNA聚合酶在引物3上添加脫氧單核苷酸?-哦end,並以此為起點,沿著模板5?→3?方向延伸,合成壹條新的DNA互補鏈。
PCR技術簡介
1和PCR技術的首次臨床應用始於鐮狀細胞和β-地中海貧血的基因突變檢測。PCR在醫學檢驗科學中最有價值的應用領域是傳染病的診斷。理論上,只要樣本中有病原體,PCR就能檢測出來。
2.PCR技術不僅能有效檢測基因突變,還能準確檢測癌基因的表達,可用於腫瘤的早期診斷、分類、分期和預後判斷。
3.PCR產物量呈指數級增加,可以將待測初始模板按皮克(pg=10-12)級擴增到μg=-6的水平。可以從654.38+0萬個細胞中檢測出壹個目標細胞;在病毒檢測中,PCR的靈敏度可達3 RFU;;在細菌學中,最低檢出率為3個細菌。
4.引物與模板的結合和引物鏈的延伸遵循堿基配對的原理。聚合酶合成反應的保真性和TaqDNA聚合酶的耐高溫性使得模板和引物的結合在更高的溫度下進行。結合的特異性大大增加,擴增的目的基因片段能保持較高的準確性。通過選擇特異性高、保守的靶基因區域,其特異性會更高。