在釋放溶液中，將lmL倒入平皿中，然後倒入培養基中混合。培養基凝固後，在30 ~ C恒溫下倒置。
培養48小時。挑單個長勢好的真菌，分成純系，直到純化(真菌大小壹致，革蘭氏染色顯微鏡
檢驗，細菌壹致)。結果分離出3株不同的菌株，分別編號為菌株1、菌株2和菌株3。然後分開轉
儲存在試管的斜面上。
分離用培養基:牛肉膏5g，蛋白腖10g，氯化鈉5g，蒸餾水1 000 mL，瓊脂20g，pH 7.0-7.2。
；保藏用斜面培養基:酵母膏1%，碳酸鈣2%，葡萄糖1%，瓊脂2%，pH 7.0。
文化條件
將分離的菌株1、2和3分別接種在四種不同的培養基上。
30歲的時候。=恒溫48小時後觀察並確定培養結果。
測定方法采用逐步稀釋法計數菌落總數。pH值用pHS-2C酸度計測量。乳酸表征
含量測定基於食品檢驗技術。
1i.2.1乳酸菌分離篩選實驗程序；自然發酵酸菜汁經稀釋、培養、單菌落染色、顯微鏡檢查。
選擇革蘭氏陽性球菌單菌落-3號培養基-選擇溶鈣圈大的球菌，在3號培養基上反復純化篩選單菌落數次。
通過在試管中穿孔，在低溫下保存好的菌株。
1.2 1.2乳酸菌的鑒定通過光學顯微鏡和放大鏡對乳酸菌的形態特征進行鑒定。生理生化特性鑒定:產奶量
酸定性試驗-乳酸紙層析0-，過氧化氫酶(接觸酶)反應？明膠水解反應，硫化氫反應，乳酸菌
發酵營養試驗0。耐鹽、耐酸和耐溫試驗。
1.2.I.3乳酸菌的保存？采用定期移栽和低溫保存的方法。培養基配方:葡萄糖1%，蛋白腖0.2%，
L (} L2PQ | 0.2%，瓊脂20%，pH 7.0，分裝試管，121。殺菌30分鐘。對數生長期後期的細胞將用於穿刺。
培養，然後密封保存在冰箱裏(5qc左右)，2個月移植1次。
1.2.2分離的乳酸菌的生理特性
1.22.1最適生長溫度OD值的測定與相同溫度下未接種的培養基進行比較，定期取出接種的培養基在721進行分光光度測定。
最大吸收光波長=6001RIifl用於測量。
1.2.2.2生長周期oD值的測定(方法同上)；PH值:PHB-4pH計；可滴定酸(以乳酸計):吸收ImL菌液。
加入9ⅱ1L蒸餾水，加入1 ~ 2滴酚酞，用0.1N NaOH滴定。
1.22.3最適pH值和最適鹽濃度的測試。
測試樣品和培養基
用於分離的樣品:泡菜汁、酸奶和西紅柿都是市售的。
分離培養基:①BCP培養基:酵母膏2 5g，蛋白腖5g，葡萄糖5g，溴甲酚紫0.04g，瓊脂15g，
蒸汽罐水lO00ml，pH7 0；；②MRS培養基見文獻。
菌種保存培養基:脫脂乳培養基:將鮮牛奶離心去除上層乳脂，下層牛奶在105℃分裝試管
消毒20分鐘。
鑒定三氟菌的培養基見參考文獻6。
1 2方法
乳酸菌的分離純化1 2 1將泡菜汁、酸奶、番茄表面洗液進行梯度稀釋，然後分別倒罐、塗膜。
方法在BCP和MRS培養基平板上用劃線法分離菌株。在BCP平板上選擇具有透明目的的菌落
MRS平板上有溶鈣環的菌落反復純化至純種，挑取細菌保存在脫脂乳試管中。
1.22乳酸菌復篩；對初篩菌株進行革蘭氏染色，保留革蘭氏陽性菌株，提高乳酸生產能力。
進行定性和定量分析，篩選並保存產酸量高的菌株，然後對產酸量高的菌株進行蘿蔔汁發酵，進壹步選擇生產
高酸純L味菌株的保存與鑒定
1 2 3紙色譜法定性測定乳酸。溶劑體系為乙醇:濃氨水:水= 80: 5: 15，顯色劑為0.04%。
溴甲酚紫酒精溶液。層析時，將乳酸和檸檬酸混合成1%標準溶液、兩種標準溶液和乳酸發酵液。
均勻采樣3。上行色譜、顯色和標準樣品比較。
用氣相色譜法對乳酸(1.24)進行了定量測定，並通過芐基酯化制備了乳酸衍生物。
在37℃的酸性培養基中培養3天並離心。刮去上清液以制備衍生物，並通過氣相色譜分析內容物。氣相色譜的工作條件如下:
EGS色譜柱，柱溫160'C，氣化溫度180' 17。，檢測器溫度l70 ℃,載氣氮氣。
1.25菌株鑒定根據《簡明第八版伯傑氏細菌鑒定手冊》和《常見細菌鑒定手冊》[6對復篩
對菌株的形態、生理生化、碳源利用等方面進行了系統鑒定，並提取了乳酸菌菌株的DNA，使用了熔解溫度
法巴g+c%含量j。
基本就是這樣。