1、將-80℃凍存的菌株接種於固體BHI培養基，置於37℃培養18h進行活化。挑取單菌落於5mL液體BHI培養基中，37℃、200r/min培養過夜。次日，按1:100的比例轉移至1L新鮮液體BHI培養基中繼續培養至OD600為1.0。
2、2.2超濾濃縮法提取膜囊泡當細菌培養至OD600為1.0時，4℃、6000r/min離心20min收集上清液，經0.45μm或0.22μm濾器過濾，除去細胞碎片等雜質後轉移至截留相對分子質量100kD的超濾濃縮管中，4℃、4000r/min離心20min。取濃縮液，經4℃、31174r/min離心3h後棄上清，用10mL的磷酸緩沖液懸浮沈澱，重復離心壹次後，將沈澱重懸於1mL磷酸緩沖液中，經0.22μm濾器過濾後進行無菌檢驗，鑒定其無菌後於-80℃保存，即為提取的膜囊泡。將所提取的EGDe、EGDeΔprfA和EGDeΔprfA+pERL3-prfA*的膜囊泡分別表示為EGDe-MVs、ΔprfA-MVs和prfA*-MVs。
3、Optiprep密度梯度離心法提取膜囊泡Optiprep梯度離心液用DMEM分別配制成濃度為25%、30%、35%、40%和45%。吸取經過超濾濃縮法(同1.2.2)提取的1mL產物轉移至Beckman離心管中，再依次加入2mL的45%、40%、35%、30%和25%Optiprep，於4℃、31174r/min進行超速離心15h。離心完畢後，小心收集30%-35%的組分於Beckman離心管中，並加入10mL磷酸緩沖液，再次進行超速離心。重復離心3次後棄上清，將沈澱重懸於1mL磷酸緩沖液中，經0.22μm的濾器過濾後進行無菌檢驗，鑒定其無菌後於-80℃保存，即為提取的膜囊泡。
4、BCA法測定膜囊泡的蛋白濃度並計算膜囊泡的產率MVs蛋白濃度的具體測定方法參見BCA蛋白濃度測定試劑盒說明書。利用稀釋平板塗布法統計OD600為1.0時的菌落數，以每1013個CFU獲得的蛋白量(μg)為膜囊泡的產率。
5、負染電鏡觀察膜囊泡的形態將銅網浸泡在MVs樣品中吸附大約20min後取出，用濾紙與銅網垂直接觸以除去多余液體。隨後將銅網浸泡在PTA染液中染色5min，取出後於陰涼處自然幹燥2-3d，即可用於電鏡觀察。
6、對細菌生物被膜形成的影響細菌生物被膜的培養及檢測參照馮飛飛等[10]的方法。將3株細菌的MVs稀釋至同壹濃度(0.2mg/mL)後，按照1:1的比例分別取100μL相應的MVs加入到含100μL菌液(同種菌株或者不同種菌株)的96孔板中。另設置2組不含MVs的參照：壹組加入等量菌液，另壹組加入等量的磷酸緩沖液。待上述操作完畢後，將96孔板置於37℃分別培養24、48和72h。培養相應時間後，酶標儀測定其OD600值，以檢測其生長情況；隨後棄去各孔培養基，所生成的生物被膜經蒸餾水洗滌，室溫幹燥後，用1%乙二酸銨結晶紫染色，並測定其OD595的光吸收值。所獲得的試驗數據使用Origin8和SPSS22進行分析處理。結晶紫染色後的生物被膜直接置於倒置顯微鏡下觀察，拍照記錄。
7、膜囊泡的溶血活性檢測溶血活性的測定參考於新惠等[12]的方法。將來源於不同菌株的MVs稀釋至同壹濃度(0.2mg/mL)後，分別取壹定量的MVs加入含1mL紅細胞懸液的離心管中，陰性對照組加入等量的磷酸緩沖液，陽性對照組加入等量的無菌水；另取等量的MVs加入1mL紅細胞懸液後再添加2mmol/LDTT。將以上離心管置於37℃孵育3h後，室溫、2600r/min離心5min，吸取800μL上清於壹次性比色皿中測定OD543的值，即為MVs的溶血活性值。
8、膜囊泡對棉鈴蟲幼蟲體重、存活率和化蛹率以及幼蟲發育時間的影響選取生理狀態基本壹致的4齡棉鈴蟲幼蟲置於冰上麻醉2h待用[13]。將來源於不同菌株的MVs稀釋至同壹濃度(0.2mg/mL)後，吸取5μLLm-MVs自幼蟲第壹腹足下註入，對照組註入等量磷酸緩沖液，每組18條幼蟲。註射完成後每隔24h稱取幼蟲體重，並統計存活率、化蛹率及幼蟲發育時間(自購買之日起至末齡)，數據的計算方法為：化蛹率=蛹數/試蟲總數×100%；存活率=存活數/試蟲總數×100%。