蛋白質和氨基酸的測定方法有哪些？向上帝求助

樓主您好:蛋白質的測定最基本的方法是定氮法，即先測定樣品中的總氮，再由總氮計算出樣品中蛋白質的含量。蛋白質含量測定最常用的方法是凱氏定氮法，凱氏定氮法是測定總有機氮最準確、最簡便的方法之壹，在國內外應用廣泛。此外，雙收縮脈沖法、染料結合法和酚試劑法也是測定蛋白質含量的常用方法。由於該方法簡單、快速，因此多用於生產單位的質量控制分析。蛋白質及氨基酸的測定蛋白質是生命的物質基礎，是生物體細胞組織的重要組成部分。所有生物都含有不同類型的蛋白質。維持人體的酸堿平衡和水平衡；遺傳信息的傳遞；物質的代謝和運輸都與蛋白質有關。人和動物只能從食物中獲取蛋白質及其分解產物來形成自身的蛋白質，所以蛋白質是人體的重要營養素，也是食物中的重要營養指標。蛋白質是壹種復雜的含氮有機化合物，分子量大，由20個氨基酸以壹定方式通過酰胺鍵結合而成，具有壹定的空間結構。不同的蛋白質具有不同的氨基酸組成比例和方式，因此不同的蛋白質具有不同的氮含量。蛋白質可以被酶、酸或堿水解，最終產物是氨基酸。氨基酸是構成蛋白質的最基本物質。在構成蛋白質的氨基酸中，亮氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、色氨酸、纈氨酸等八種氨基酸在人體內無法合成，因此被稱為必需氨基酸。它們對人體有著極其重要的生理功能，經常因體內缺乏而導致疾病，或者通過補充來增強新陳代謝。因此，食品及其原料中蛋白質和氨基酸的分離、鑒定和定量具有重要意義。蛋白質的測定蛋白質的測定是最基本的測氮方法，即先測定樣品中的總氮，再由總氮計算出樣品中蛋白質的含量。蛋白質含量測定最常用的方法是凱氏定氮法，凱氏定氮法是測定總有機氮最準確、最簡便的方法之壹，在國內外應用廣泛。此外，雙收縮脈沖法、染料結合法和酚試劑法也是測定蛋白質含量的常用方法。由於該方法簡單、快速，因此多用於生產單位的質量控制分析。該方法適用於各種食品中蛋白質的測定。1.原理食物用硫酸和催化劑加熱消化分解蛋白質，分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨。然後堿蒸餾使氨遊離出來，被過量的硼酸吸收後，用硫酸或鹽酸的標準溶液滴定，用酸的消耗量乘以換算系數得到蛋白質含量。反應過程分為三個階段，用以下反應式表示。①消化2nh 2(CH2)2coo H4-13 h2so 4-(NH。)2s 04+6 C02+12s 0 =+16h 20(NH4)2s 04+2na()h-2 NH3 ten+2h 20+。Na2s042nh3+4h3803-、(NH4)2 B207+5H20 ③滴定(NH4)2 B207+2 HCl+5h 20-nh4c 1+4h 38032。儀器①消化器。(2)凱氏氮蒸餾裝置。3.試劑所用試劑均為蒸餾水配制，不含氨。試劑是分析純的。①CuS04 .②K2SO .③濃H2SO 4。④2%氫.波.解決方案。⑤混合指示劑:使用時將1份O.1%甲基紅乙醇溶液和5份O.1%溴甲酚綠乙醇溶液混合。使用時也可將2份O.1%甲基紅乙醇溶液與1份0.1%亞甲藍乙醇溶液混合使用。⑥飽和氫氧化鈉:將500 g氫氧化鈉加入500 mL水中，攪拌溶解，冷卻放置數日，澄清後使用。⑦ 0.01tooli。1 '或0.05tool稱為HCl標準溶液(使用前需用無水碳酸鈉標定)。4.操作步驟①樣品消解:準確稱取0.2 ~ 2.0克固體樣品或2 ~ 5克半固體樣品或吸取5 ~ 20毫升液體樣品。釋放500海裏。在幹燥的凱氏燒瓶中加入0.2g硫酸銅、3 g硫酸鉀和20 mL濃HzSOa，在凱氏瓶口放壹個小漏鬥，用45。角度斜撐在有小孔的石棉網上。(更多詳細咨詢請參考www.rmhot.com，國家標準材料網)用電爐小火加熱。待內容物完全碳化，泡沫停止後，加大火力使瓶中液體保持微沸，再繼續微熱30 min，直至液體變為藍綠色透明。冷卻，小心加入20 mL水，然後冷卻至室溫，轉移至100 mL容量瓶中，用少量水將燒瓶洗液洗凈後放入容量瓶中，加水至刻度，混勻備用。除不加樣品外，取與處理樣品等量的硫酸銅、硫酸鉀和硫酸，用同樣方法做試劑空白消解。(2)將蒸汽發生器瓶中的水加至2/3左右，加入幾滴甲基紅指示液和幾毫升硫酸，使水保持酸性，加入幾粒玻璃珠防止沸騰，將蒸汽發生器瓶中的水加熱煮沸。(3)在接收瓶中加入10 ml的2%硼酸溶液和L滴混合指示液，將冷凝管下端插入液面下，吸取lO mI。樣品消化稀釋液從小玻璃流入反應室，用10 mL水沖洗小燒杯流入反應室，塞住小玻璃的棒狀玻璃塞。將3 ~ 10 ml飽和氫氧化鈉溶液倒入小玻璃杯中，提起玻璃塞使其緩慢流入反應室，立即蓋緊玻璃塞，向小玻璃杯中加水，防止漏氣。擰緊螺旋夾，開始蒸餾。將蒸汽引入反應室，使氨通過冷凝管進入接收瓶，蒸餾進行2-5分鐘。然後移動接收瓶使冷凝管下端離開液面，再用少量中性水沖洗冷疑管下端外側，然後蒸餾接收瓶1 min，終點用0.01 mol滴定至灰色或藍紫色。調用0.05mol 1 HCl標準溶液。同時吸收10 mI_，試劑空白消化液按③操作。5.算6。說明①幹樣品用稱量紙稱重，用紙壹同消化，空白管也用稱量紙消化。②含糖量高、含油量高的樣品，消化時容易溢出，加熱要慢。③氨是否蒸餾完全，可以通過用pH試紙檢測餾出液是否呈堿性來判斷。(4)實驗前，必須仔細檢查蒸餾裝置的所有接頭，確保不漏氣。所用的橡膠軟管和塞子應浸泡在氫氧化鈉(10%)中並煮沸10分鐘，然後用水清洗，用水煮沸，然後用水清洗。⑤小心加入樣品，以免汙染凱氏定氮法的瓶口和瓶頸。