在補充有100 mg L-1氨芐青黴素的魯利亞-貝爾塔尼(LB)培養基上,在搖瓶中以37℃和200 rpm培養4小時,然後以100 rpm培養10小時。從總共3 L培養物中收獲細胞,重懸於100 mM磷酸鉀緩沖液(pH 7.0,含1?間苯甲磺酰氟(PMSF)達到OD600 ) 600,並在法國壓機(SLM-Aminco)中裂解
翻譯:表達Globinexpressing的大腸桿菌培養物在搖瓶中從100在37℃和200℃下生長4小時,並補充有100 mg L-1氨芐青黴素的luria-Bolta(磅)。從3個培養物中收獲細胞,並懸浮在pH值為7.0和1.5的100 mm磷酸鉀緩沖液中。間苯甲磺酰氟(PMSF)達到OD600)600,在法國報紙上被破解(蘇丹解放運動Aminco)。
翻譯2:
所有蛋白質純化步驟均在4℃下進行。通過離心澄清裂解物
和過濾(0.45?m)。his-標記的Hb和flavoHb蛋白在親和柱Sephadex HisTrap螯合柱(Amersham Pharmacia Biotech)上純化,並在咪唑緩沖液(在100 mM磷酸鉀緩沖液中的40和300 mM咪唑,pH 7.0)中逐步洗脫,然後用脫鹽柱(Sephadex G25)洗脫。樣品純度估計為& gt細菌Hbs的95%和
& gtSDS-12%聚丙烯酰胺凝膠中90%的黃素血紅蛋白用考馬斯亮藍染色
蛋白質的純化步驟全部完成,離心通過4℃裂解澄清。
和過濾(0.45?m)。His標記的血紅蛋白和flavoHb經蛋白親和柱、葡聚糖HisTrap螯合柱(分離液)、100 mm磷酸鉀緩沖液、pH值7.0咪唑緩沖液(40和300 mm咪唑逐級洗脫)純化後脫鹽(葡聚糖到達東路)。樣本的純度估計為“95%細菌血紅蛋白”
其中90%用SDS flavoHbs-12%%聚丙烯酰胺凝膠考馬斯亮藍染色。
翻譯3:
通過煮沸純化的蛋白質樣品3分鐘,從flavoHb中釋放FAD,並通過與作為標準的純FAD比較,在460 nm激發下測定520 nm的熒光,從而測定FAD含量。
粉底含量測定粉底由flavoHb(煮沸3分鐘的純化蛋白樣品)和520 nm激發熒光組成,決定釋放460 nm,與作為標準的相對純的粉底相比。